توضیحات
کیت استخراج پلاسمید از باکتری پازمد:
پلاسمید چیست؟ به مولکلول DNA دو رشته ای درون سلول های باکتریایی و برخی یوکاریوت ها میگویند،که متمایز از DNA کروموزومی میتواند تکثیر کند،و حامل ژن های مختلفی است که دارای ویژگی هایی چون مقاوت به آنتی بیوتیک است.
باکتری ها قادر هستند،که پلاسمیدهای جدیدی را از سایر سلول های باکتریایی و یا از محیط دریافت کنند،و نیز می توانند به راحتی پلاسمید های گرفته شده را از دست بدهند.هر پلاسمید دارای منشأ همانند سازی خاص خود است که این ویژگی باعث می شود باکتری میزبان از آن پلاسمید تکثیر کند.در نتیجه پلاسمیدها می توانند خود را به طور مستقل از کروموزوم باکتریایی تکثیر پیدا کنند.
پلاسمیدها به باکتری ها برای زنده ماندن کمک می کنندو با اینکه پلاسمیدها حاوی فقط چند ژن هستند،ولی تفاوت زیادی در باکتری های میزبان خود به وجود می آورند. این ژن ها به باکتری ها کمک می کنند تا بر اوضاع تنش زای به وجود آمده برایشان غلبه کنند.
برای مثال:باکتری با بیان ژن های مقاومت به آنتی بیوتیک که در پلاسمید ها وجود دارند،با آنتی بیوتیک مقاوم میشوند.در نتیجه وقتی با آن آنتی بیوتیک درمان شود، از بین نمی رود.
محلول‌های موجود در کیت کیت استخراج پلاسمید به روش ستونی:
- محلول شماره 1: تنظیم محتوای بافری نمونه
- محلول شماره 2: شکست دیواره باکتریایی
- محلول شماره 3: رسوب مواد ناخواسته و اتصال DNA پلاسمیدی به ستون
- محلول شماره4: شستشوی ستون حاوی ِDNA پلاسمیدی
- محلول شماره 5: برای آزادسازی و بازیابی DNA از ستون
- آنزیم RNase A : برای هضم آنزیمی RNA
روش انجام کار استخراج پلاسمید :
- کشت سلولی مورد نظر را با سرعت بالا سانتریفیوژ میکنیم و سپس مایع رویی دور ریخته می شود.
- با افزودن بافر شماره 1 به رسوب سلولی سوسپانسیون باکتریایی حاصل می شود و به تیوب جدید منتقل میکنیم.
- در مرحله بعد محلول شماره 2 اضافه شده و سپس تیوب به آرامی برای 10بار سرو ته می شود.
- سپس محلول شماره 3اضافه می شود تیوب برای10 تا 12 بار به آرامی سرو ته می گردد.
- در مرحله بعد به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ می شود.
- سپس سوپرناتانت را به ستون کیت منتقل میکنیم و در ادامه به مدت 30 ثانیه سانتریفیوژ میکنیم و در نهایت مایع جمع شده در تیوب دور ریخته می شود.
- اکنون محلول شماره 5 را اضافه می کنیم و دوباره به مدت 30 ثانیه سانتریفیوژ میکنیم و باز مایع جمع شده دور ریخته می شود.
- میتوانیم برای حذف باقی مانده های بافر شستشو،به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ انجام دهیم.
- و در آخر محلول شماره 6 یا آب دیونیزه را اضافه میکنیم،و به مدت 1 دقیقه در دمای اتاق قرار میدهیم و پس از آن به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ پایانی را انجام میدهیم.
شما میتوانید دیگر کیت های استخراج،مثل کیت استخراج DNA از باکتری و … را از شرکت دانش بنیان پاز تهیه نمایید.
مجموعه PAZ مفتخر است با ارائه مواد و تجهیزات آزمایشگاهی با بهترین قیمت و کیفیت در خدمت جامعه آزمایشگاهی کشور و پیشرفت آن باشد.
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.